ПЦР исследования

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – высокоточный метод молекулярно-генетической диагностики, который позволяет выявить у человека различные инфекционные и наследственные заболевания, как в острой стадии, так и задолго до того, как заболевание может себя проявить.
Это самый современный метод молекулярной биологии.
В настоящее время метод амплификации нуклеиновых кислот (НК) полимеразной цепной реакцией (ПЦР) уже достаточно широко используется в нашем центре как эффективный инструмент лабораторной диагностики.

Лаборатория оснащена необходимым современным оборудованием для ПЦР. В наличии имеется Амплификатор с детекцией в режиме реального времени CFX 96 Touch. Данный прибор относится к новейшей линейке приборов компании BIO-RAD (США) — амплификаторам серии 1000. Он занимает одно из лидирующих мест на рынке ПЦР-диагностики. Позволяет проводить мультиплексный анализ до 5 мишеней (5 инфекций в одной пробирке) в 96 пробах одновременно. Также имеется амплификатор АЛА ¼ производства Латвии. При помощи данного прибора проводится исследование по «конечной точке», т.е. на наличие ДНК/РНК возбудителя (без определения количества). Диагностические наборы реагентов для выявления и количественного определения ДНК/РНК возбудителей урогенитальных инфекций, гепатитов и пневмоний приобретаются в ООО «ИнтерЛабСервис» г. Москва.

Материалом для ПЦР-исследования, в котором можно выявить чужеродную ДНК или РНК бактерии или вируса могут служить различные биологические среды и жидкости человека: моча, плазма крови, мокрота, соскоб эпителиальных клеток, сок простаты, околоплодные воды, плевральная жидкость.

При обследовании на инфекции, передающиеся половым путем (ИППП), у мужчин и женщин с помощью стерильного зонда из половых органов делается соскоб из шейки матки, влагалища или соскоб из уретры (мочеиспускательного канала), моча.

При обследовании на инфекции (герпетические инфекции, ЦМВИ, гепатиты В, С, Д) на ПЦР забирают кровь.

При обследовании на вирусы Эпштейн-Барра, Цитомегаловирус и Герпес 6-го типа в качестве материала забираются кровь из вены, слюна или соскоб из ротовой полости.

Перечень исследований:

1.Определение ДНК вируса гепатита В (HBV) в плазме крови методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме «реального времени».

Аналитические показатели

Определяемый фрагмент – специфичный участок ДНК вируса гепатита В. Специфичность определения - 100%. Чувствительность определения - 50 МЕ/мл.

2. Количественное определение ДНК вируса гепатита В (HBV) (оценка вирусной нагрузки) в плазме крови методом ПЦР с детекцией в режиме реального времени.

Аналитические показатели

Определяемый фрагмент – специфический участок ДНК вируса гепатита В. Клиническая специфичность теста: 100%. Чувствительность теста составляет 75 МЕ/мл.

Количественная характеристика содержания ДНК гепатита В в клинических образцах важна для оценки эффективности противовирусной терапии.

3. Определение РНК вируса гепатита С (HСV) в плазме крови методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме «реального времени».

Аналитические показатели

Определяемый фрагмент - специфичный участок РНК вируса гепатита С. Специфичность определения - 100%. Чувствительность определения – 50 МЕ/мл.

В острую фазу гепатита С РНК вируса выявляют в крови уже через 1-2 недели после инфицирования, т. е. задолго до появления антител к гепатиту С.

4. Количественное определение РНК вируса гепатита С (оценка вирусной нагрузки) в плазме крови методом ПЦР с детекцией в режиме реального времени.

Аналитические показатели

Определяемый фрагмент – специфический участок РНК вируса гепатита С. Клиническая специфичность теста: 100%. Анализируются генотипы 1, 2,3. Чувствительность теста составляет 150 МЕ/мл.

Количественная характеристика содержания РНК гепатита С в клинических образцах важна для оценки эффективности противовирусной терапии и имеет прогностическое значение для определения хронизации этого гепатита. Если концентрация вируса меньше 8х10^5 МЕ/мл, то прогноз курса лечения благоприятный, если выше, то необходимо использовать другие схемы лечения. Вирусная нагрузка ниже 8х10^5 МЕ/мл наряду с определением генотипа вируса является независимым и наиболее информативным параметром прогнозирования эффективности лечения. Снижение концентрации РНК гепатита С к третьему дню от начала терапии на 85% является быстрым и точным параметром для предсказания эффективности терапии, приводящей к раннему вирусологическому ответу.

5. Определение РНК вируса гепатита D (НDV) в сыворотке крови методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме «реального времени».

Вирус гепатита D передаётся парентеральным путём и обнаруживается только у лиц, инфицированных вирусом гепатита В. Развивающийся в этом случае хронический гепатит, протекает очень тяжело, c массивным поражением печени, часто сопровождается отёками и асцитом.

Аналитические показатели

Определяемый фрагмент - специфичный участок РНК вируса гепатита D. Специфичность определения - 100%. Чувствительность определения - 50 МЕ/мл.

6. Определение ДНК вируса простого герпеса (HSV) I типа (губного или лабиального) и II типа (генитального) в соскобах эпителиальных клеток урогенитального тракта методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Вирусы простого герпеса 1-го (ВПГ-1) типа и 2-го (ВПГ-2) типа относят к семейству герпесвирусов (Herpesviridae), общим свойством которых является постоянное персистирование в организме после инфицирования. Попадают в организм через слизистые (обычно «входные ворота» для ВПГ-1 – слизистые ротовой полости и носоглотки, для ВПГ-2 – слизистые половых органов). Клинические проявления герпетической инфекции в любой форме (высыпания на коже и слизистых оболочках, симптомы поражения нервных клеток и др.), как правило, свидетельствуют о снижении иммунитета. Первичная герпетическая инфекция и реактивация инфекции (в гораздо меньшей степени) в период беременности могут вызывать патологию беременности, внутриутробное инфицирование плода или инфицирование ребенка во время родов.

7. Определение ДНК Цитомегаловируса (CMV) в крови и соскобах эпителиальных клеток урогенитального тракта методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Цитомегаловирус – широко распространённый вирус семейства герпесвирусов. После окончания острого периода инфекция цитомегаловирусом обычно переходит в латентную форму, из которой может реактивироваться. Цитомегаловирус относят к так называемым оппортунистическим инфекциям: выраженные клинические проявления CMV-инфекции отмечаются чаще всего у пациентов с врождёнными или приобретенными иммунодефицитами (в том числе вследствие ВИЧ-инфекции, применения иммунодепрессантов при трансплантации органов и др.), а также на фоне физиологических иммунодефицитных состояний (дети первых 3 - 5 лет жизни, беременные).

Первичная инфекция или (в меньшей степени) реактивации инфекции в период беременности связаны с риском внутриутробной инфекции, опасной для развития плода. Проявления инфекции зависят от особенностей иммунитета матери, вирулентности и локализации вируса. В целях выявления возможной инфицированности организма цитомегаловирусом, оценки риска возникновения острой инфекции, распознавания первичной инфекции целесообразно выявление вирусной ДНК методом ПЦР.

Важно! CMV-инфекция входит в группу TORCH-инфекций (название образовано начальными буквами в латинских наименованиях - Toxoplasma, Rubella, Cytomegalovirus, Herpes), считающихся потенциально опасными для развития ребёнка. Лабораторное обследование на TORCH-инфекции наиболее целесообразно проводить за 2 - 3 месяца до планируемой беременности. Это даёт возможность предпринять необходимые лечебные или профилактические меры, и служит точкой сравнения с результатами обследований во время беременности.

8. Качественное обнаружение ДНК вируса папилломы человека (HPV) 14 типов высокого онкогенного риска: 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 52, 58, 59, 67 в соскобе эпителиальных клеток урогенитального тракта.

Вирус папилломы человека (ВПЧ) может быть причиной возникновения рака гениталий у женщин и плоскоклеточного рака у мужчин и женщин. Доказано, что этот вирус является причиной возникновения остроконечных кондилом, кондилом и новообразований шейки матки. Различные виды ВПЧ являются причиной различных поражений. Некоторые из них являются факторами высокого онкогенного риска.

Формат выдачи результата включает суммарный ответ по всем указанным типам ВПЧ-обнаружено/не обнаружено. Результат ОБНАРУЖЕНО следует интерпретировать как наличие в образце специфических участков ДНК одного или нескольких типов ВПЧ без указания конкретного типа (16 тип идентифицируется). Результат НЕ ОБНАРУЖЕНО следует интерпретировать как отсутствие в образце специфических участков ДНК ВПЧ всех указанных типов.

9. Определение ДНК возбудителя гонореи (Neisseria gonorrhoeae) в соскобе эпителиальных клеток урогенитального тракта методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Гонорея - венерическое заболевание вызывается грамотрицательным диплококком - Neisseria gonorrhoeae. Передаётся половым путем, поражая преимущественно слизистые оболочки мочеполовой системы.

У мужчин возбудитель гонореи является причиной уретритов, стриктуры уретры, эпидидимита, простатита, орхита и других заболеваний яичек и его придатков.

У женщин проявляется как уретрит, бартолинит, эндоцервицит, эндометрит, сальпингит и пельвиоперитонит. Симптомы хронической гонореи у женщин могут быть минимальными, заболевание трудно диагностируется.

Новорожденные могут заразиться гонореей при прохождении ребёнка через родовые пути матери (бленнорея новорожденных).

10. Определение ДНК гарднереллы (Gardnerella vaginalis) в соскобах эпителиальных клеток урогенитального тракта методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Гарднереллёз (бактериальный вагиноз) чаще выявляется у женщин детородного возраста. Заболевание возникает как следствие резкого нарушения баланса микрофлоры влагалища: преобладающие в норме лактобактерии замещаются анаэробными микроорганизмами. Гарднереллёз может являться причиной осложнений беременности: воспалительных заболеваний, маточных кровотечений, послеродового эндометрита, пневмонии у новорождённых.

11. Качественное определение ДНК микоплазмы (Mycoplasma genitalium) в соскобах эпителиальных клеток урогенитального тракта, методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Mycoplasma genitalium – микроорганизм, обладающий высокой патогенностью по отношению к клеткам эпителия мочеполовых органов человека, обладает высокой контагиозностью, то есть почти всегда передается половому партнеру. Часто являться причиной негонококкового уретрита и простатита, патологии беременности и плода, бесплодия у женщин и мужчин. Микоплазма гениталиум способна прикрепляться к сперматозоидам и снижать их функциональность (в том числе подвижность), а это может приводить к развитию мужского бесплодия. У женщин этот возбудитель все чаще выявляется при острых эндометритах и аднекситах – воспалениях матки с придатками. Установлено, что Mycoplasma genitalium может вызывать трубное бесплодие у женщин.

12. Определение ДНК Mycoplasma pneumoniae в соскобе эпителиальных клеток из ротоглотки методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

13. Определение ДНК Chlamydia pneumoniae в соскобе эпителиальных клеток из ротоглотки методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Микоплазменная и/или хламидийная пневмония. Атипичные микроорганизмы, вызывающие пневмонию, составляют от 8 до 25% случаев заболевания. В половине случаев ошибочно диагностируются бронхит, трахеит или ОРЗ. Поэтому диагностика микроплазменной и хламидийной пневмоний основывается в первую очередь на выявлении с помощью полимеразно-цепной реакции (ПЦР).

14. Определение ДНК микоплазмы (Mycoplasma hominis) в соскобах эпителиальных клеток урогенитального тракта методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

В настоящее время микоплазмы принято считать условно-патогенными микробами.

Микоплазмы передаются половым путём, могут являться причиной негонококкового уретрита и простатита, воспалительных заболеваний, патологии беременности и плода, бесплодия у женщин и мужчин. Эти микроорганизмы можно обнаружить, по разным данным, у 15-50% здоровых женщин.

15. Определение ДНК yреаплазмы (Ureaplasma urealyticum/parvum) в соскобе эпителиальных клеток урогенитального тракта методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Уреаплазмы в настоящее время принято считать условно-патогенными микробами. Уреаплазмы передаются при половых контактах, могут являться причиной негонококкового уретрита и простатита, воспалительных заболеваний, патологии беременности и плода, бесплодия у женщин и мужчин.

16. Определение ДНК хламидии (Chlamydia trachomatis) в соскобе эпителиальных клеток урогенитального тракта методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Хламидии - облигатные внутриклеточные паразиты, передающиеся преимущественно половым путём, и вызывающие хламидиоз (в первую очередь, поражения слизистых оболочек половых путей, конъюнктивиты). Достаточно широко распространённая инфекция, может протекать бессимптомно, часто переходит в хроническую форму, сопровождается различными осложнениями, которые иногда у женщин являются причиной бесплодия и невынашивания беременности.

Особенности жизненного цикла Chlamydia trachomatis приводят к частому возникновению персистирующей формы инфекции, малочувствительной к терапии. Реактивация инфекции может произойти под действием изменения иммунного или гормонального статуса, травмы, операции, стресса. У Chlamydia trachomatis низкая иммуногенность, вследствие чего у 50% инфицированных людей антитела не обнаруживаются. Поэтому (особенно в сомнительных случаях, при отсутствии антител к хламидии) микроорганизм выявляют только высокочувствительным и специфичным прямым методом – ПЦР.

17. Определение ДНК Кандиды (Candida albicans) в соскобе эпителиальных клеток урогенитального кожи методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Кандиды выявляются на слизистых оболочках полости рта и желудочно-кишечного тракта у 30-50% здоровых людей и на слизистых оболочках гениталий у 20-30% здоровых женщин. При этом важно различать кандидоз и колонизацию слизистых оболочек и кожи. Микозы обычно развиваются у пациентов с различными нарушениями в системе противоинфекционной защиты (факторами риска).

18. Определение ДНК трихомонады (Trichomonas vaginalis) в соскобах эпителиальных клеток урогенитального тракта, методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Трихомониаз - заболевание мочеполового тракта. Trichomonas vaginalis относится к роду простейших жгутиковых, является строгим облигатным паразитом человека. Это одно из самых частых заболеваний, передающихся половым путем. У мужчин поражается уретра, предстательная железа и семенные пузырьки, у женщин – влагалище, шейка матки и уретра.

19. Определение ДНК вируса Эпштейн-Барра (Epstein-Barr virus) в крови методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме «реального времени».

Вирус Эпштейн-Барр - является наиболее частой причиной инфекционного мононуклеоза у молодых людей. Характеризуется лихорадкой, недомоганием, фарингитом, лимфоаденопатией и лимфоцитозом. Вирус передается оральным (через слюну) и половым путем.

20. Определение ДНК вируса герпеса 6 типа в крови методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме «реального времени».

Вирус герпеса 6 типа вызывает у детей (в возрасте младше 2,5 лет) внезапную экзантему. В начале высыпания появляются на спине и шее, затем на руках и ногах, на лице сыпь отсутствует. У некоторых заболевших детей лихорадка может приводить к эпилептическим припадкам. Вирус передается оральным и аэрозольным путем. Аналитическая чувствительность тестов для урогенитальных инфекций составляет 1х103 ГЭ/мл.

21. Тест «ФЛОРОЦЕНОЗ».Комплексная оценка условно-патогенной и патогенной (NCMT) микрофлоры

Тест ФЛОРОЦЕНОЗ позволяет комплексно оценить состав биотопа влагалища у женщины репродуктивного возраста и с учетом остроты и риска возникновения осложнений в кратчайшие сроки поможет поставить этиологический диагноз, который позволит назначить эффективную терапию.

В тесте проводится дифференциальная диагностика следующих заболеваний:

• Бактериальный вагиноз
  (выявление ДНК и определение соотношения Gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae, Lactobacillus spp. и Bacteria spp. в количественном формате)
• Аэробный вагинит
  (выявление ДНК и определение соотношения Enterobacteriaceae, Staphylococcus spp., Streptococcus spp. с Lactobacillus spp. и Bacteria spp. в количественном формате)
• Кандидозный вульвовагинит
  (выявление ДНК Candida albicans, Candida glabrata, Candida krusei, Candida parapsilosis/ tropicalis в количественном формате)
• Условно – патогенные микоплазмы
  (выявление ДНК Mycoplasma hominis, Ureaplasma parvum и Ureaplasma urealyticum в количественном формате)
• Патогены
  (выявление ДНК Neisseria gonorrhoeae, ДНК Chlamydia trachomatis, ДНК Mycoplasma genitalium и ДНК Trichomonas vaginalis в количественном формате)

Материал для исследования – мазок из влагалища.

Срок исполнения 4 дня.

Исследование проводиться:

• Только женщинам репродуктивного возраста.
• через 3-4 недели после последнего применения антибактериальных/антисептических препаратов.
• За 24 часа до взятия биоматериала не рекомендуется совершать половой акт, спринцевание влагалища и другие инвазивные манипуляции.

Нарушения микрофлоры влагалища широко распространены. К примеру, БВ встречается у 30-40% женщин, ВВК – у 20-45% женщин репродуктивного возраста.

Тест Флороценоз рекомендован при:

• Профилактическом обследовании
• Выделениях из половых путей
• Зуде, жжении, дискомфорте в области половых органов
• Планировании беременности
• Беременности
• Планировании инвазивных манипуляций на органах малого таза